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一、產(chǎn)品介紹

1．產(chǎn)品背景

Fluor熒光染料為活性熒光染料，該系列包括從紫外、可見光譜到近紅外光譜常見熒光染料，用于標(biāo)記生物分子，特別是蛋白質(zhì)和核酸。對核心結(jié)構(gòu)的創(chuàng)新性修改使得 Fluor染料優(yōu)于具有許多創(chuàng)新新穎特征的其他商業(yè)染料，主要表現(xiàn)在標(biāo)記效率更高，發(fā)光度更強。

Fluor770是一種熒光染料，其激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為783nm和758nm，它與抗體形成更特異的抗體熒光素結(jié)合物，背景較更低。

2．基本原理

本試劑盒主要通過熒光素集團(tuán)的活性鍵與生物分子的游離氨基共價結(jié)合，可以用于標(biāo)記抗體，蛋白，。本試劑盒種所提供的熒光染料都為預(yù)先活化，可以直接用于標(biāo)記實驗。標(biāo)記產(chǎn)物可以放置在4?C至少保存6個月以上。

本試劑盒常常被用于一抗的直接標(biāo)記，主要優(yōu)點是省卻了二抗的使用和其所帶來的操作步驟。

二、主要信息

1．試劑盒已經(jīng)提供的材料：

活化的Frdbio? Fluor770溶液: 已活化，可直接用于標(biāo)記      1支.

Frdbio? Fluor770標(biāo)記緩沖液: 優(yōu)化最適標(biāo)記反應(yīng).            1 支.

純化超濾管:                                         1支.

注意：試劑盒中所配超濾管標(biāo)示的截留分子量必須小于待標(biāo)記分子分子量2倍以上

本試劑盒主要有以下幾種規(guī)格：

· 100 μg (1 x 100 μg), 可以用于50μg-150μg抗體標(biāo)記1次，最佳標(biāo)記量為100μg。

· 300 μg (300 μg), 可以用于150μg-450μg抗體標(biāo)記1次，每次最佳標(biāo)記量為450μg。

· 1mg (1 x 1mg), 可以用于500μg-1500μg抗體標(biāo)記1次，每次最佳標(biāo)記量為1000μg。

2．其他需要自備材料：

? 待標(biāo)記的生物分子

? 移液器及吸頭.

? 去離子水.

? PBS (pH 7.4)

3．試劑盒儲存

試劑盒放在-20?C可保存6個月以上。.

三、試劑盒使用操作流程

1．試劑準(zhǔn)備

待標(biāo)記的生物分子與熒光素最佳摩爾比例為1:8-1:22,本試劑盒推薦最佳比例為1:15； 為了獲得最佳的摩爾比例，可以要通過預(yù)實驗進(jìn)行摸索。以抗體標(biāo)記為例，推薦量如下。最佳標(biāo)記體系應(yīng)保證抗體的濃度為2mg/ml，標(biāo)記時終濃度不低于1mg/ml。對于其他標(biāo)記量，參照表按等比例調(diào)整抗體的體積和用量。

2．樣品準(zhǔn)備

待標(biāo)記的分子濃度不低于2 mg/ml，如果濃度較低，需在實驗之前濃縮到2mg/ml以上；待標(biāo)記的分子需要溶解在符合以下要求的緩沖液中，如果符合以下要求可以直接進(jìn)行標(biāo)記，如果不符合請將溶液置換（透析或者超濾）到符合要求的溶液中在進(jìn)行標(biāo)記實驗。

溶液中一定不能含有游離氨基，否則會影響標(biāo)記效率。

3．操作流程(以標(biāo)記100ug抗體為例,2mg/ml)

1). 取5 μl Frdbio? Fluor770標(biāo)記緩沖液，加入到上述準(zhǔn)備好的待標(biāo)記抗體溶液中，用移液器輕輕混勻

2). 打開活化的Frdbio? Fluor770溶液蓋子，取2.5 μl加入到步驟1的溶液中，去離子水補足到50 μl，輕輕混勻，37°C 避光反應(yīng)1小時。

3). 反應(yīng)完畢，將適量的PBS（約450u L）加入到步驟2的混合溶液中，輕輕混勻并將溶液移至超濾管，4°C 12000離心10min。

4) .將超濾管芯內(nèi)溶液輕輕混勻并吹打管心內(nèi)壁，并轉(zhuǎn)移到一干凈離心管中即為熒光素標(biāo)記產(chǎn)物。

4．標(biāo)記產(chǎn)物的保存

根據(jù)實驗需要調(diào)整到合適的濃度，可加入適量BSA，甘油及防腐劑等，分裝成小分-20°C避光保存。

四、技術(shù)支持

常見問題及解決辦法

Q: 待標(biāo)記分子經(jīng)過濃縮濃度仍然達(dá)不到2 mg/ml，再濃縮就產(chǎn)生沉淀了怎么辦?

A: 標(biāo)記的時候盡可能達(dá)到這個濃度，如果實在達(dá)不到這個濃度，步驟2不需要再補足去離子水，適當(dāng)增加加入的活化的熒光素的量；最佳標(biāo)記效果可以梯度增加熒光素用量試驗測試來確定。

Q: 待標(biāo)記分子與熒光素的最佳摩爾比只能是1:8 - 1:22之間？

A: 這個要根據(jù)不同生物分子性質(zhì)確定，更準(zhǔn)確的說與生物分子表面氨基個數(shù)有關(guān)系；最佳標(biāo)記比例可根據(jù)梯度用量測試確定。

Q: 如果選擇標(biāo)記試劑盒中的超濾管型號?

A: 一般來說，您待標(biāo)記生物分子的分子量是超濾管截留分子量的2倍以上最好；比如，標(biāo)記抗體，抗體分子量為150Kd,選擇分子截留75kD以下的都可以，分子量截留越小，超濾越慢。如果分子量太小，標(biāo)記完以后建議用更高精度的純化方式，比如，10kD分子量建議用HPLC純化