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- 產(chǎn)品名稱： Human IL-6 ELISA Kit
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSK00014
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 2800
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 100
- 規(guī)格：
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品英文名（Product Name）
Human IL-6 ELISA Kit
產(chǎn)品描述（Description）
本試劑盒采用定量雙抗夾心ELISA分析技術(shù)，將抗人IL-6單克隆抗體預(yù)先包被在酶標(biāo)板上，之后將標(biāo)準(zhǔn)品和分析樣品加入到微孔中，樣品中IL-6抗原會(huì)被預(yù)包被的抗體捕獲，清洗掉未結(jié)合的物質(zhì)后，將生物素標(biāo)記的抗人IL-6單克隆抗體加入到微孔中反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，再加入HRP酶標(biāo)記的親和素，清洗掉未結(jié)合的抗體及酶試劑之后，將顯色底物溶液添加到微孔中顯色，顯色強(qiáng)度與樣品中IL-6濃度成正比。
本試劑盒用于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清和血漿中人白細(xì)胞介素6（IL-6）的濃度。
儲(chǔ)存條件（Storage）
收到試劑盒后請(qǐng)將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液 A、檢測(cè)溶液 B 以及預(yù)包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請(qǐng)置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?試劑盒按推薦溫度保存6個(gè)月，信號(hào)強(qiáng)度降低小于 10%。
運(yùn)輸方式（Shipping）
藍(lán)冰運(yùn)輸。
Note
For research use only
使用方法（Standard Operating Procedure）所需設(shè)備及試劑
? 450 nm濾光片酶標(biāo)儀，含540 nm或570nm校正波長(zhǎng)更佳
?單道或多道微量移液器，移液器槍頭
?去離子水
? 500 mL量筒
?樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
?吸水紙
一、樣品收集和儲(chǔ)存
1.細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000x g離心15分鐘，取上清檢測(cè)，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)
凍融。
2.血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過(guò)夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測(cè)，或分裝后
于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
3.血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內(nèi)1000 x g離心15分
鐘，取上清檢測(cè)，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
二、試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑和標(biāo)本置于室溫平衡。
1.濃縮清洗液: 如果濃縮液中有晶體析出，加熱至室溫并輕輕混合，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用離子水定容至500mL，得到清洗工作液。
2.用0.5ml標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解IL-6標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉，溶解后標(biāo)準(zhǔn)品母液濃度為1600pg/mL。震蕩混勻后靜置10分鐘，用移液槍取100μL 標(biāo)準(zhǔn)品母液至EP管中, 再取700μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至EP管中，得到第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)200pg/mL，依次進(jìn)行倍比稀釋操作得到共計(jì)7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、6.25pg/mL、3.125pg/mL最后再以100ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為零標(biāo)準(zhǔn)（0 pg/mL），共計(jì)8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，建議每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少做2個(gè)平行孔。
3.檢測(cè)溶液A（生物素標(biāo)記），使用前震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測(cè)溶液稀釋液1:100稀釋至工作濃度。
4.檢測(cè)溶液B（HRP標(biāo)記），使用前震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測(cè)溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
5.顯色液: 避光保存，顯色時(shí)100μL /孔。
6.終止液：顯色完畢后50μL /孔。
三、使用前將所有試劑和樣品置于室溫。建議對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品進(jìn)行一式兩份的分析。
1.按照前面章節(jié)的指示準(zhǔn)備所有試劑和準(zhǔn)備工作。
2.從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3.每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，用封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
4.棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗液清洗，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標(biāo)板倒扣在吸水紙
上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復(fù)洗板 3 次，此過(guò)程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器
或自動(dòng)洗板機(jī)來(lái)完成。
5.每孔加入100μL檢測(cè)溶液A（生物素標(biāo)記），用新的封板膜封住，37℃孵育30分鐘。
6.重復(fù)步驟4中的洗板程序。
7.每孔加入100μL檢測(cè)溶液B（HRP標(biāo)記），用新的封板膜封住。37℃孵育30分鐘。
8.重復(fù)步驟4中的洗板程序。
9.每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色10分鐘。
10.每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應(yīng)該由藍(lán)色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，
輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板板使顏色均一。
11.擦干酶標(biāo)板底部水氣，立刻用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度值（O.D.值），如果波長(zhǎng)
校正可用，則設(shè)置為540 nm或570 nm，如果波長(zhǎng)校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或
570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標(biāo)板讀數(shù)中的光學(xué)偏差，如果沒(méi)有校正波長(zhǎng)，可直接讀取450 nm
的讀數(shù)，但讀值有可能會(huì)更高、更不準(zhǔn)確。
四、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的復(fù)孔平均值O.D.，減去零標(biāo)準(zhǔn)孔平均值O.D.后，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，O.D.值為橫坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2值越趨近于1曲線越精確），然后再將樣品的平均值O.D.帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，計(jì)算出樣品濃度。
如果樣品已經(jīng)稀釋，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
五、標(biāo)曲案例
標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于演示， 每次實(shí)驗(yàn)均需生成單獨(dú)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
六、檢測(cè)范圍
3.125pg/mL—200pg/mL
七、最低檢測(cè)限(MDD)
0.5pg/mL
MDD是測(cè)試20個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)（稀釋液）的平均O.D.值上加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差后計(jì)算相應(yīng)的濃度來(lái)確定的。
八、精密度
批內(nèi)差： CV<12%
批間差： CV<15%
九、穩(wěn)定性
試劑盒按推薦溫度保存6個(gè)月，信號(hào)強(qiáng)度降低小于 10%。
十、回收率
分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入低，中，高濃度的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定值與理論值的比率即為回收率。
十一、線性
分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入一定量的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，使用稀釋液倍比稀釋成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待測(cè)樣本，稀釋后樣本中 IL6 含量的測(cè)定值與理論值的比率即為線性范圍。
十二、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)說(shuō)明
1.在試劑盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
2.如果樣品檢測(cè)值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，可使用適當(dāng)?shù)南♂屢合♂寴悠凡⒅匦聹y(cè)定，或預(yù)估樣品中IL6濃度，在實(shí)驗(yàn)之前預(yù)先稀釋數(shù)個(gè)梯度同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。
3.為避免交叉污染，不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨(dú)的容器儲(chǔ)存。
4.在孵育過(guò)程中貼緊封板膜。
5.顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。
6.濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實(shí)驗(yàn)人員自備。
7.終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時(shí)避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應(yīng)，如情節(jié)嚴(yán)重請(qǐng)及時(shí)就醫(yī)。
8.試劑盒酶標(biāo)板條可按需拆卸使用，已開(kāi)封的試劑盒建議在1個(gè)月內(nèi)使用，未開(kāi)封的試劑盒以包裝盒上保質(zhì)期為準(zhǔn)。
回收率
分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入低，中，高濃度的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定值與理論值的比率即為回收率。
| 樣本類型 | 平均回收率（%） | 回收率范圍（%） |
| 血清（n=5） | 92 | 85-98 |
| EDTA 血漿 (n=5) | 93 | 82-101 |
| 肝素 血漿(n=5) | 88 | 87-97 |
| 培養(yǎng)基(n=5) | 94 | 92-101 |
線性
分別于培養(yǎng)基，血清和血漿樣本中加入一定量的 IL6標(biāo)準(zhǔn)品，使用稀釋液倍比稀釋成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待測(cè)樣本，稀釋后樣本中 IL6 含量的測(cè)定值與理論值的比率即為線性范圍。
| 樣本類型 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
| 血清（n=5） | 92-101% | 91-105% | 89-107% | 88-110% |
| EDTA 血漿 (n=5) | 93-103% | 92-111% | 83-112% | 88-110% |
| 肝素 血漿(n=5) | 95-108% | 94-112% | 91-111% | 95-109% |
| 培養(yǎng)基(n=5) | 94-105% | 93-111% | 89-105% | 85-112% |
| 樣品名稱 | 規(guī)格 | 描述 | 推薦儲(chǔ)存條件 |
| IL6抗體預(yù)包板 | 1板 | 96孔聚苯乙烯微孔板（12條*8孔），預(yù)包被抗人IL-6特異性單克隆抗體。 | 密封狀態(tài)放置于-20℃保存。 |
| IL6標(biāo)準(zhǔn)品 | 1瓶 | 800pg重組人IL-6凍干粉（含防腐劑），使用前復(fù)溶于0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，終濃度為1600pg/mL。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 檢測(cè)溶液A
| 1管 | 120μL Biotin標(biāo)記IL-6單克隆抗體（含防腐劑），臨用前用抗體稀釋液1:100稀釋至工作濃度。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 檢測(cè)溶液B
| 1管 | 12μL HRP標(biāo)記的鏈酶親和素（含防腐劑），臨用前用抗體稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1瓶 | 25 mL稀釋液（含防腐劑），用于標(biāo)準(zhǔn)品、上清、血清、血漿的稀釋。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 檢測(cè)溶液稀釋液 | 1瓶 | 25 mL稀釋液（含防腐劑），用于檢測(cè)溶液A和檢測(cè)溶液B的稀釋。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 濃縮清洗液 | 1瓶 | 25 mL （20×）濃度的清洗液（含防腐劑），臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 顯色液 | 1 瓶 | 12 mL TMB（四甲基聯(lián)苯胺）。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 終止液 | 1 瓶 | 6 mL 2M 酸液。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 封板膜 | 4 片 | 用于實(shí)驗(yàn)中封閉酶標(biāo)板。 | 放置于常溫保存。 |
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