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概述（Summary）

產(chǎn)品描述（Description）

包涵體是指超表達的蛋白在細胞胞漿內(nèi)或膜間內(nèi)凝集形成的無活性的固體顆粒。包涵體形成的主要原因在重組蛋白的表達過程中缺乏某些蛋白折疊輔助因子，或環(huán)境不適導致無法形成正確的蛋白次級鍵。由于包涵體主要由超表達的重組蛋白質(zhì)組成，因此分離純化包涵體是分離純化具有活性的重組蛋白的第一步。本公司生產(chǎn)的包涵體純化試劑盒用于快速純化包涵體得到可溶蛋白，無需繁瑣變復性即可用于后續(xù)實驗。

儲存條件（Storage）

常溫保存，保質(zhì)期一年。

Note

For research use only .

使用方法（Standard Operating Procedure）

1.收集包涵體
（1）離心收集培養(yǎng)好的菌液。
（2）加入10ml（建議體積為1/20的菌體培養(yǎng)體積）的Buffer P1懸浮菌液（建議一次處理200ml菌液）。
（3）冰浴下超聲，破菌 8s，間隔 8s，80 次（頻率 200Hz 以上）.
注意：此步驟需低溫，快速。
（4）立刻加入蛋白酶抑制劑PMSF等。
（5）4℃，10000g離心10min，收集包涵體。

2.包涵體純化
2.1蛋白包涵體表達量高時，可按以下步驟快速獲得大量可溶的重組蛋白
注：使用前請將10 × Buffer P2母液按照1:10稀釋成工作液，再進行如下操作：
（1）包涵體用10ml的Buffer P2重懸。
（2）4℃，10000g離心10min，收集包涵體。
（3）重復以上兩步操作 3-6次。（該步驟建議段時超聲處理離心后結塊的包涵體，充分洗滌，能有效提高最終包涵體純度）
（4）棄上清，倒扣吸干殘液。
（5）加入2ml的P3 充分溶解包涵體（根據(jù)包涵體的量可適當調(diào)整dP3使用體積），如有部分不溶解，超聲處理或者適當提高P3用量。
（6）4 ℃，10000g離心10min，收集上清。
（7）更換終Buffer進行透析。（需自備，建議為TBS Buffer，pH 8.0）
（8）4℃，10000g離心10min，收集上清，即為所需蛋白。（如果蛋白出現(xiàn)大量沉淀，透析前終Buffer中加入1%體積的Buffer P5可有效減少蛋白損失）

2.2蛋白包涵體表達量低時，按以下步驟獲得純度較好的可溶的重組蛋白（以Ni柱親和純化為例）
（1）加入2ml的P3 充分溶解包涵體（根據(jù)包涵體的量可適當調(diào)整dP3使用體積），如有部分不溶解，超聲處理或者適當提高P3用量，然后加入等體積ddH2O。
（2）4℃，10000g離心10min，轉(zhuǎn)移上清至干凈的小管中。
（3）后續(xù)純化過程同可溶蛋白純化步驟。用Ni填料吸附蛋白，洗滌Buffer洗去雜蛋白，洗脫Buffer獲得目的蛋白。洗滌Buffer和洗脫Bufferr中均添加1/10體積Buffer P4 有助于提高可溶蛋白得率。
（4）更換終Buffer進行透析。（需自備，建議為TBS Buffer，pH 8.0）
（5）4℃，10000g離心10min，收集上清，即為所需蛋白。（如果蛋白出現(xiàn)大量沉淀，透析前終Buffer中加入1%體積的Buffer P5可有效減少蛋白損失）

組分&說明（Component & Instruction）