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- 產(chǎn)品名稱： BL21(DE3) Chemically Competent Cell
- 產(chǎn)品貨號： CSKT104L
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價格與訂購： 360
- 數(shù)量：
庫存： 5
- 規(guī)格： 200×100ul
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品規(guī)格
Cat No. CSKT104L （100μl×200支）
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存條件：-80℃
保質(zhì)期： 6個月
基因型
F– ompT hsdS(rB–mB–) gal dcm(DE3)
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產(chǎn)品說明
BL 21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于BL21的染色體上。適合于非毒性蛋白的表達(dá)。BL 21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)106 ~107cfu/μg DNA。
操作方法
一 、熱激轉(zhuǎn)化法
1.從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過夜預(yù)冷的搖菌管 中，加入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物，輕輕混勻，冰浴30分鐘。
2.42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過程不要搖動搖菌管。
3.向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率），37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4.根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求（質(zhì)粒），吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過夜。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法
注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時，需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率，當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時，該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基，在37℃ 180rpm孵育1小時，然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. BL 21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì) 粒）并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水 漬。錨點(diǎn)
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
1. 剛剛化凍的細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率最高。
2. 避免反復(fù)化凍。
3. 避免移液槍吹吸。
4. 整個操作過程要輕柔。
5. 重組產(chǎn)物不建議用10分鐘快速轉(zhuǎn)化法。
6. 表達(dá)感受態(tài)不建議用于重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化。
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Note
For research use only .
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