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- 產(chǎn)品名稱： Stbl3 Competent Cell
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSKT110L
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 360
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 5
- 規(guī)格： 200×100ul
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品規(guī)格
Cat No：CSKT110L （100μl×200支）
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存條件： -80℃
保質(zhì)期： 6個(gè)月
基因型
F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Strr) xyl-5 λ-leu mtl-1 endA1+
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產(chǎn)品說(shuō)明
Stbl 3感受態(tài)細(xì)胞是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的感受態(tài)細(xì)胞。基因組含有重組酶recA13突變，可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。Stbl3感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>109cfu/μg DNA。
操作方法
一 、熱激轉(zhuǎn)化法
1.從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過(guò)夜預(yù)冷的搖菌管中，加入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物，輕輕混勻，在冰浴中放置30分鐘。
2.42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)搖菌管。
3.向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率），37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4.根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求（質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化），吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平 板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法
注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時(shí)，需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率，當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時(shí)，該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基，在37℃ 180rpm孵育1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. Stbl 3感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無(wú)水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
1. 剛剛化凍的細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率最高。
2. 避免反復(fù)化凍。
3. 避免移液槍吹吸。
4. 整個(gè)操作過(guò)程要輕柔。
5. 重組產(chǎn)物不建議用10分鐘快速轉(zhuǎn)化法。
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Note
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