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- 產(chǎn)品名稱： DNaseⅠ, RNase-Free
- 產(chǎn)品貨號： CSME0108
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價格與訂購： 300
- 數(shù)量：
庫存： 100
- 規(guī)格： 1KU
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品概述
DNaseⅠ(脫氧核糖核酸酶Ⅰ)，即DeoxyribonucleaseⅠ，是一種可消化單鏈或雙鏈DNA的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶，它識別并切割磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5'端為磷酸基團，3'端為羥基的單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸。DNaseⅠ的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子Mg2+、Mn2+等激活。在Mg2+存在的情況下，該酶可隨機識別并切割雙鏈DNA任意一條鏈上的任意位點；而在Mn2+存在的情況下，可識別并切割DNA兩條鏈上幾乎相同的位點，產(chǎn)生平末端或有1 - 2個核苷酸突出的粘末端DNA片段。
產(chǎn)品組分
| 組 分 | CSME0108 (1,000 U) |
| DNaseⅠ(2 U/μl) | 0.5 ml |
| 10×Reaction Buffer | 1.25 ml |
保存條件
-30 ~ -15℃保存。運輸條件：≤0℃。
單位定義
37℃ 10 min，將能夠完全降解1 μg pUC19質(zhì)粒DNA所需的酶量定義為1個活性單位(U)。
質(zhì)量控制
純度：≥90%；
RNase殘留檢測：使用100 U本品，參照RNaseAlert QC System說明書未檢測到RNase殘留；
功能檢測：投入500 ng 人源基因組DNA，經(jīng)1 U DNaseⅠ處理后，進行兩對質(zhì)控引物的qPCR檢測，清除效率>99.9%。
適用場景
適用于RNA提取、體外轉(zhuǎn)錄、RT-PCR實驗中DNA的去除，DNaseⅠ印跡(DNaseⅠ footprinting)，缺口平移 (nicktranslatioin)，DNA隨機片段文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)實驗。
注意事項
1. 在使用本品進行RNA樣品中DNA的清除實驗時，可在反應(yīng)體系中添加Murine RNase Inhibitor以保護RNA不被降解。
2. 部分實驗條件下，DNaseⅠ的最佳使用量需要通過實驗進行調(diào)整。
3. 失活或抑制：加入終濃度為5 mM的EDTA并經(jīng)過65℃加熱10 min，或通過酚氯仿抽提可使DNaseⅠ失活。此外，使用金屬離子螯合劑， 達到毫摩爾/升濃度的鋅離子，0.1%的SDS，DTT、巰基乙醇等還原劑，50 - 100 mM以上鹽濃度均對DNaseⅠ的活性有顯著抑制作用。
應(yīng)用實例
體外轉(zhuǎn)錄后模板DNA的去除
1. 每0.5 μg模板DNA的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中加入1 U DNaseⅠ；
2.用移液槍輕輕吹打混勻，37℃ 15 min；
3.酚/氯仿抽提失活DNaseⅠ。
Note
For research use only .
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