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- 產(chǎn)品名稱： T4 DNA Ligase
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSCE1106
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 160
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 100
- 規(guī)格： 40KU
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品概述
T4 DNA Ligase可催化dsDNA平末端或粘性末端相鄰核酸的5'磷酸末端和3'羥基末端形成磷酸二酯鍵，還可催化RNA和雙鏈中的ssDNA或RNA鏈連接，但不能催化全單鏈核苷酸連接。適用于標(biāo)記RNA 3'-末端，環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
產(chǎn)品組分
| 組分 | CSCE1106(40,000 U) |
| T4 DNA Ligase (400 U/μl) | 100 μl |
保存條件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃運(yùn)輸。
適用范圍
1. DNA片段和載體DNA的連接。
2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的連接。
單位定義
在20μl的連接反應(yīng)體系中，6μg的λDNA-HindⅢ的分解物在16℃下反應(yīng)30 min時(shí)，有50%以上的DNA片段被連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
反應(yīng)過(guò)程
1.在微量離心管中制配制連接反應(yīng)體系：
滅菌蒸餾水 To 10 μl
10 × Ligase Buffer 1 μl
插入片段a 0.3 pmol
載體DNAb 0.03 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl) 1 μl
a. 插入片段與載體的摩爾比應(yīng)在3:1 - 10:1之間。
b. 平末端載體與DNA片段進(jìn)行連接時(shí)，應(yīng)首先將載體進(jìn)行去磷酸化處理，以防止其自身環(huán)化。
2. 16℃過(guò)夜反應(yīng)
3. 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
①在冰上解凍克隆用的化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞(如：DH5α Competent cell)。
②取10 μl連接產(chǎn)物加入到100 μl感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈管壁混勻(請(qǐng)勿振蕩混勻)，冰上靜置30 min。
▲ 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過(guò)所用感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。
③ 42℃水浴熱激45 sec后，立即置于冰上冷卻2 - 3 min。
④加入900 μl SOC或LB培養(yǎng)基(不添加抗生素)，37℃搖菌1 h(200 - 250 rpm)。
⑤將相應(yīng)抗性的LB平板固體培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱。
⑥ 5,000 rpm(2,400 × g)離心5 min，棄掉900 μl上清。用剩余培養(yǎng)基將菌體重懸，用無(wú)菌涂布棒在含有正確抗性的平板上輕輕涂勻。⑦ 37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)12 - 16 h。
Note
For research use only .
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